细胞的核数并非所有细胞都是单核的。例如，破骨细胞是一种高度分化的多核细胞，它们没有克隆能力，无法在体外进行传代培养，且其培养较为困难。

骨代谢：基础知识

在探讨骨代谢之前，我们首先需要了解相关的专业术语。

骨重塑

骨重塑是指破骨细胞清除旧的或受损的骨质，并由成骨细胞形成新的骨骼的过程。这一过程受到破骨细胞与成骨细胞之间的相互作用调控。

破骨细胞

破骨细胞（Osteoclasts，OC）是一类源自造血干细胞的骨吸收细胞，通过分泌酸性酶和蛋白水解酶来降解骨组织。

成骨细胞

成骨细胞（Osteoblasts，OB）是由间充质前体细胞经转录因子的持续作用分化而来的，最终形成骨细胞。

骨矿化

骨矿化是指钙及磷等无机盐在骨组织中沉淀的过程，使骨骼形成一种高度矿化的结构。骨骼不仅为身体提供支撑，还保护重要器官，并为骨髓提供造血场所。此外，骨骼也是体内无机离子（尤其是钙和磷酸盐）的主要储存库，在维持矿物质平衡和能量代谢中起着重要作用。

骨吸收

骨吸收是指骨钙的溶出过程，破骨细胞通过分解骨组织释放钙到血液中。破骨细胞在维持骨稳态和健康中至关重要，并且是唯一明确能够降解骨的细胞。

破骨细胞的体外诱导

使用RAW264.7细胞系诱导破骨细胞的实验步骤如下：

1. 将RAW264.7细胞用含10% FBS的α-MEM培养基制成细胞悬液，以3×10⁴细胞/孔的密度接种于24孔板中。
2. 细胞接种12小时后，加入RANKL（20-100 ng/mL）。每3天更换培养基，同时补充RANKL。
3. 经过四天的培养，明显的多核破骨细胞开始出现，并在第5至第6天逐渐增多。

因RAW264.7细胞表达M-CSF及其受体c-fms，单独加入RANKL即可诱导破骨细胞的分化，无需额外添加M-CSF。

破骨细胞的鉴定

形态学鉴定

1. 多核巨细胞：在显微镜下可见至少三个细胞核（成熟破骨细胞通常含10-20个核）。
2. 伪足结构：活化破骨细胞边缘呈现“皱褶缘”，为骨吸收的功能区域，通过鬼笔环肽染色观察特征性“封箱带”结构。

功能标志物检测

1. Trap染色：破骨细胞中产生抗酒石酸酸性磷酸酶（Trap），作为其特有的重要标志物。
2. 骨吸收实验：将骨髓单核细胞（BMMs）接种于羟基磷灰石涂层板或骨片，观察吸收陷窝。

分子标志物检测

通过qPCR/WB检测Trap、NFATc1、CTSK（组织蛋白酶K）和DC-STAMP等分子标志物。

对于需要使用的产品，可参考以下品牌尊龙凯时提供的优质科研试剂，例如RANKL和M-CSF等。

以上内容为破骨细胞及骨代谢相关的基础知识和实验方法，希望对生物医疗研究有所帮助。